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Cell-Free Protein Synthesis Kit Pro
無細(xì)胞蛋白合成試劑盒（促溶加強版）
- EG25301S
- EG25301M
產(chǎn)品介紹
無細(xì)胞蛋白合成試劑盒（Cell-Free Protein Synthesis Kit）是一款基于大腸桿菌細(xì)胞裂解液進行體外蛋白質(zhì)合成的產(chǎn)品。該產(chǎn)品利用細(xì)胞裂解液中的核糖體、翻譯因子、酶等活性物質(zhì)，同時補加能量、核苷酸、氨基酸、無機鹽等，在體外重構(gòu)轉(zhuǎn)錄-翻譯體系。以DNA或RNA為模板，表達(dá)出蛋白質(zhì)。無細(xì)胞蛋白表達(dá)是一種不依賴于活菌，能夠快速、靈活地大量表達(dá)蛋白質(zhì)，和傳統(tǒng)的重組表達(dá)體系相比有眾多的優(yōu)勢：
1.蛋白表達(dá)快，1~2 h即可表達(dá)出目的蛋白，8~24 h即可達(dá)到最大量。
2.蛋白表達(dá)量高，最高可達(dá)到3 mg/ml以上的蛋白。
3.反應(yīng)簡單靈活，僅需向反應(yīng)體系中加入DNA或RNA模板，可使用96孔板或離心管進行反應(yīng)。
注：本貨號產(chǎn)品含有伴侶蛋白，能夠促進蛋白可溶性表達(dá)。
產(chǎn)品組成
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組分 |
規(guī)格S |
規(guī)格M |
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Cell-free system solution A Pro |
300 μl |
1.5 ml |
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Cell-free system solution B |
600 μl |
3 ml |
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CFPS-Control Plasmid |
2 μg |
2 μg |
儲運條件
-80℃保存，有效期12個月。
干冰運輸。用戶開封后，將無細(xì)胞蛋白表達(dá)反應(yīng)組分置于-80℃儲存。
為避免反復(fù)凍融，可根據(jù)反應(yīng)用量，將A液和B液分別分裝后用液氮速凍后再置于-80℃儲存。
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相關(guān)問答
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Q:
使用本品表達(dá)其他蛋白，是不是根據(jù)提供的質(zhì)粒骨架進行替換 superfolder GFP 的CDS區(qū)域即可？
A:表達(dá)其他蛋白時，只替換superfolder GFP會殘留N端的標(biāo)簽，如果不需要標(biāo)簽替換從ATG到TAA整個翻譯區(qū)。
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Q:
質(zhì)粒骨架的 T7 啟動子→T7 終止子以外的質(zhì)粒骨架序列是否可以替換？還是必須用您這邊的骨架序列？
A:可以，例如pET9a、pET23a等質(zhì)粒也可以，重點是T7啟動子到T7終止子序列不建議替換，質(zhì)粒骨架可以換。
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Q:
T7 promoter后面到蛋白的CDS區(qū)域質(zhì)檢的 5’UTR序列是否是您這邊經(jīng)過優(yōu)化的？未進行標(biāo)注的關(guān)鍵區(qū)域是否可以再進行序列優(yōu)化和替換？
A:5’UTR是優(yōu)化的，不建議替換。T7啟動子到T7終止子區(qū)域不建議替換，如果該區(qū)域有優(yōu)化需求可自行嘗試優(yōu)化，其它區(qū)域都可以優(yōu)化和替換。
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Q:
加入模板DNA的最低濃度是多少？是否DNA模板加入量和蛋白表達(dá)效率相關(guān)？
A:模板DNA濃度低于4 ng/μl，會降低表達(dá)量。模板DNA加入量和蛋白表達(dá)量有關(guān)，建議根據(jù)蛋白優(yōu)化，一般8 ng/μl左右就可以。
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Q:
相同模板的蛋白表達(dá)量組間差和批間差是否穩(wěn)定，是否有相關(guān)數(shù)據(jù)？
A:相同模板的蛋白表達(dá)量組間差和批次差相對穩(wěn)定，偏差約10%~20%左右。
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Q:
無細(xì)胞表達(dá)與傳統(tǒng)大腸桿菌表達(dá)的區(qū)別是什么？
A:對比項
無細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)
傳統(tǒng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)
定義
無細(xì)胞蛋白表達(dá)屬于體外反應(yīng)系統(tǒng)，無需完整活細(xì)胞，直接利用細(xì)胞提取物（含核糖體、酶、tRNA、氨基酸等翻譯所需成分），在體外環(huán)境中完成轉(zhuǎn)錄和翻譯。
傳統(tǒng)大腸桿菌表達(dá)依賴活的大腸桿菌細(xì)胞，通過將目的基因?qū)爰?xì)胞，利用細(xì)胞自身的轉(zhuǎn)錄、翻譯機制（體內(nèi)環(huán)境）合成蛋白。
實驗流程
模版制備→無細(xì)胞反應(yīng)
質(zhì)粒構(gòu)建→轉(zhuǎn)化大腸桿菌→篩選陽性克隆→擴大培養(yǎng)→誘導(dǎo)表達(dá)→收集細(xì)胞→裂解純化
耗費時間
1~2 h 即可表達(dá)出目的蛋白，8~16 h 即可達(dá)到最大量
時間數(shù)天到數(shù)周
特殊蛋白表達(dá)
可表達(dá)各種類型的蛋白，包括毒性蛋白、富含二硫鍵蛋白
或難溶蛋白
毒性蛋白、富含二硫鍵蛋白或難溶蛋白表達(dá)困難
操作便捷性
簡單快捷，開蓋即用，僅需加入 DNA 或 RNA 模板
對實驗條件和操作技能要求高
應(yīng)用靈活性
可使用 96 孔板或離心管進行反應(yīng)，高通量篩選；修飾等更靈活
難以實現(xiàn)高通量表達(dá)和篩選
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Q:
合成的蛋白質(zhì)可以使用哪些方法純化？
A:可以使用鎳磁珠純化。
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Q:
是否需要在合成前純化質(zhì)?；蚓€性 DNA 模板？
A:說明DNA的質(zhì)量對無細(xì)胞很關(guān)鍵，可以使用高品質(zhì)的質(zhì)粒小量制備試劑盒或 PCR 和 DNA 純化試劑盒。
