Cell-Free Protein Synthesis Kit
無細胞蛋白合成試劑盒
- EG24301S
- EG24301M
產(chǎn)品介紹
無細胞蛋白合成試劑盒（Cell-Free Protein Synthesis Kit）是一款基于大腸桿菌細胞裂解液進行體外蛋白質合成的產(chǎn)品。該產(chǎn)品利用細胞裂解液中的核糖體、翻譯因子、酶等活性物質，同時補加能量、核苷酸、氨基酸、無機鹽等，在體外重構轉錄-翻譯體系。以DNA或RNA為模板，表達出蛋白質。無細胞蛋白表達是一種不依賴于活菌，能夠快速、靈活地大量表達蛋白質，和傳統(tǒng)的重組表達體系相比有眾多的優(yōu)勢：
1.蛋白表達快，1~2 h即可表達出目的蛋白，8~24 h即可達到最大量。
2.蛋白表達量高，最高可達到3 mg/ml以上的蛋白。
3.反應簡單靈活，僅需向反應體系中加入DNA或RNA模板，可使用96孔板或離心管進行反應。
注：本貨號產(chǎn)品不適合可溶表達含二硫鍵的蛋白，不具備二硫鍵正確折疊的氧化環(huán)境；如需可溶表達含二硫鍵的蛋白，請聯(lián)系其他貨號。
產(chǎn)品組成
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組分 |
規(guī)格S |
規(guī)格M |
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Cell-free system solution A |
300 μl |
1.5 ml |
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Cell-free system solution B |
600 μl |
3 ml |
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CFPS-Control Plasmid |
2 μg |
2 μg |
儲運條件
-80℃保存，有效期12個月。
干冰運輸。用戶開封后，將無細胞蛋白表達反應組分置于-80℃儲存。
為避免反復凍融，可根據(jù)反應用量，將A液和B液分別分裝后用液氮速凍后再置于-80℃儲存。
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相關問答
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Q:
使用本品表達其他蛋白，是不是根據(jù)提供的質粒骨架進行替換 superfolder GFP 的CDS區(qū)域即可？
A:表達其他蛋白時，只替換superfolder GFP會殘留N端的標簽，如果不需要標簽替換從ATG到TAA整個翻譯區(qū)。
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Q:
質粒骨架的 T7 啟動子→T7 終止子以外的質粒骨架序列是否可以替換？還是必須用您這邊的骨架序列？
A:可以，例如pET9a、pET23a等質粒也可以，重點是T7啟動子到T7終止子序列不建議替換，質粒骨架可以換。
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Q:
T7 promoter后面到蛋白的CDS區(qū)域質檢的 5’UTR序列是否是您這邊經(jīng)過優(yōu)化的？未進行標注的關鍵區(qū)域是否可以再進行序列優(yōu)化和替換？
A:5’UTR是優(yōu)化的，不建議替換。T7啟動子到T7終止子區(qū)域不建議替換，如果該區(qū)域有優(yōu)化需求可自行嘗試優(yōu)化，其它區(qū)域都可以優(yōu)化和替換。
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Q:
加入模板DNA的最低濃度是多少？是否DNA模板加入量和蛋白表達效率相關？
A:模板DNA濃度低于4 ng/μl，會降低表達量。模板DNA加入量和蛋白表達量有關，建議根據(jù)蛋白優(yōu)化，一般8 ng/μl左右就可以。
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Q:
相同模板的蛋白表達量組間差和批間差是否穩(wěn)定，是否有相關數(shù)據(jù)？
A:相同模板的蛋白表達量組間差和批次差相對穩(wěn)定，偏差約10%~20%左右。
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Q:
無細胞表達與傳統(tǒng)大腸桿菌表達的區(qū)別是什么？
A:對比項
無細胞表達系統(tǒng)
傳統(tǒng)細胞表達系統(tǒng)
定義
無細胞蛋白表達屬于體外反應系統(tǒng)，無需完整活細胞，直接利用細胞提取物（含核糖體、酶、tRNA、氨基酸等翻譯所需成分），在體外環(huán)境中完成轉錄和翻譯。
傳統(tǒng)大腸桿菌表達依賴活的大腸桿菌細胞，通過將目的基因導入細胞，利用細胞自身的轉錄、翻譯機制（體內(nèi)環(huán)境）合成蛋白。
實驗流程
模版制備→無細胞反應
質粒構建→轉化大腸桿菌→篩選陽性克隆→擴大培養(yǎng)→誘導表達→收集細胞→裂解純化
耗費時間
1~2 h 即可表達出目的蛋白，8~16 h 即可達到最大量
時間數(shù)天到數(shù)周
特殊蛋白表達
可表達各種類型的蛋白，包括毒性蛋白、富含二硫鍵蛋白
或難溶蛋白
毒性蛋白、富含二硫鍵蛋白或難溶蛋白表達困難
操作便捷性
簡單快捷，開蓋即用，僅需加入 DNA 或 RNA 模板
對實驗條件和操作技能要求高
應用靈活性
可使用 96 孔板或離心管進行反應，高通量篩選；修飾等更靈活
難以實現(xiàn)高通量表達和篩選
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Q:
合成的蛋白質可以使用哪些方法純化？
A:可以使用鎳磁珠純化。
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Q:
是否需要在合成前純化質粒或線性 DNA 模板？
A:說明DNA的質量對無細胞很關鍵，可以使用高品質的質粒小量制備試劑盒或 PCR 和 DNA 純化試劑盒。
